„Southern blot” változatai közötti eltérés
[nem ellenőrzött változat] | [ellenőrzött változat] |
Tartalom törölve Tartalom hozzáadva
a Bot: következő módosítása: ta:சதர்ன் படிவு |
aNincs szerkesztési összefoglaló |
||
5. sor:
#A A DNS-t ezután [[denaturál]]ják [[NaOH]] segítségével, melynek következtében a DNS két szála elválik egymástól. A DNS denaturálása fontos a későbbi membránhoz való kötődés és a próbákhoz való kapcsolódás miatt.
#[[Nitrocellulóz]] vagy [[nylon]] membránt helyeznek a gél tetejére, amire több rétegben papírtörölköző kerül. A kapillárishatás miatt a minták felfelé mozdulnak el, kikötődnek a memránra, megőrizve a gélbeli egymáshoz viszonyított helyzetüket.
#Aztán nitrocellulóz membrán esetében száraz hőkezelés (60-100
#Majd a membránt hibridizációs próbával kezelik – ami egy olyan specifikus szekvenciával rendelkező DNS molekula, mely a vizsgálni kívánt szakasszal komplementer. A próba jelölve van, vagy radiokatívan vagy fluoreszcensen, esetleg kromogenikus festékkel, hogy a próba bekötési helye láthatóvá váljon. Egyes esetekben, a hibridizációs próbát [[RNS|RNS-ből]] készítik.
#A hibridizációt követően, a nem hibridizált próbákat lemossák a felületről, és a hibridizációs mintázatot [[Röntgen-film]]en [[autoradiográfia|autoradiográfiával]] vagy fluorescens jelölés esetén fluorométerrel, esetleg a kromogén szubsztát alkalmazásával enzimatikus színreakcióval teszik láthatóvá.
|